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灭菌,消毒   

2015-12-16 06:22:21|  分类: 生物信息 |  标签: |举报 |字号 订阅

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培养基、器皿、接种工具的彻底灭菌,环境及某些材料的消毒,是防止杂菌污染,保证纯培养的关键步骤。常用方法如下。干热灭菌 通过加热使蛋白质变性或凝固,或直接烧死菌体。又分为:1.烧灼灭菌:直接用火焰烧灼用具上的杂菌,如接种时在火焰上灼烧接种工具、试管口、瓶口等,或焚烧废弃的带菌物品。2.烘箱灭菌:玻璃器皿、接种用具、手术器械经包装后,放电热干燥 箱中,升温至160~170℃,1~2小时,可彻底杀灭杂菌。灭菌后的物品保持干燥,带包装存放备用,不易污染。但应注意温度及时间均不可超过上述规定,否则包装纸被烤焦,不宜使用。 湿热灭菌 直接煮沸或用饱和水蒸汽的高温进行灭菌或消毒。常用的方法有高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、巴斯德灭菌、煮沸消毒等。 1.高压蒸汽灭菌(autoclaving):亦称饱和蒸汽灭菌。是医疗保健、发酵工业及微生物实验、科研中常用的灭菌方法。利用水的沸点随水蒸汽的压力增加而上升所产生的高温,达到灭菌的目的。常用的灭菌装置为高压灭菌锅,是用铝、铁等金属制成的可密闭容器,可承受一定压力(一般耐压为5公斤/厘米2),分为手提式、立式及卧式等。加热后锅底的水不断产生蒸汽,待冷空气排除后,使完全密闭,温度即可随蒸汽压力而上升。常用于培养基、水等灭菌,1.05公斤/厘米2(15磅/英寸2),即温度121℃,15~20分钟即可。使用高压锅在升压前必须充分排除冷空气,才能保证压力上升与温度上升相一致;到达所需压力(温度)必须保持恒温,到达恒温时间后,切断电源,待压力缓缓下降至零点,方可排汽、开盖。 2.间歇灭菌:在没有高压灭菌锅时,采用常压间歇蒸煮的方法灭菌。即将待灭菌的培养基等放在蒸锅内,经100℃热蒸汽蒸3次,每次30~60分钟。第一、二次蒸后放25~30℃恒温过夜,以使未杀死的芽孢萌发,待第三次蒸后,即可达到灭菌的目的。但此法较麻烦,且会使培养基营养成分破坏,在设备允许的情况下,不宜采用。 3.巴斯德灭菌:由巴斯德首创。即在60℃条件下保持30分钟,可杀死致病微生物而保持营养成分不被破坏。因仅杀死致病微生物,故又称巴氏消毒法。常用于牛乳、啤酒等食品的消毒。 4.煮沸消毒:把物品直接放在清水中煮沸,5分钟以上可杀死全部营养细胞,15~20分钟或在水中加入1%碳酸钠,效果更佳。用于带菌物品、器皿的初步清洗。 接种室、接种箱的灭菌和消毒 1.紫外光照射:一般实验室使用30瓦紫外光灯,距桌面约1米,工作前清洗桌面,照射20~30分钟即可保持无菌状态。使用紫外灯灭菌,一定要在工作开始前关闭,以免损伤皮肤及粘膜。 2.化学药剂消毒:接种室及接种箱使用前后均需用2~3%来苏水或5%石炭酸擦洗及喷洒,以增强紫外线的杀菌效果。 3.硫磺或甲醛熏蒸:较大的接种空间,可用硫磺熏蒸。用量为每平方米空间3~4克。熏蒸前先将地面及墙面喷洒少量水,将硫磺放金属器皿中再加热。甲醛熏蒸需用高锰酸钾做氧化剂。通常每立方米空间用6~8毫升40%甲醛(市售福尔马林),4~5克高锰酸钾。室内打扫擦净后,将高锰酸钾放在容器中(玻璃、陶瓷器皿),然后倒入甲醛(不必加热)。以上熏蒸均刺激呼吸道、眼等处、操作者应迅速离开,过夜后方能入室工作。
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